Tiivistys- ja saastumisongelmat monikerroksisilla soluviljelylevyillä

Monikuoppaisten soluviljelylevyjen lataaminen ja käsittely:

Soluviljelylevy noudattaa myös tiukan asepsen periaatetta solujen toimintojen suorittamisessa. Kaikki toiminnot on oltava standardisoitu ja tieteellinen, eikä se aiheuta lisävaikutuksia solujen kasvuun. Yleisin ongelma on, kuinka varmistaa solujen yhtenäisyys näytteen lisäämisen jälkeen ja minimoida väliaineen vaihtamisen vaikutukset solujen kasvutilaan.

kysyä:
96- ja 24-kuoppalevyjen tai Petri-ruokien kannet ovat erittäin löysät, mikä on kätevää tuuletukselle, mutta myös bakteerit, home ja muut epäpuhtaudet liukuvat?

vastaus:
Kansi on hyvin löysä, joka kuuluu puoliksi avoimeen kulttuuriin, ja tämän tarkoituksena on tuulettaa (itse asiassa se on tehdä hiilidioksidi kulttuuriruoan ulkopuolelle vaihtamaan täysin viljelylautasen kanssa ja ylläpitämään kulttuurin pH-arvoa keskipitkä).
Kaikella on etuja ja haittoja, jotka tietysti lisäävät pilaantumisen mahdollisuutta. Lisäksi tämä aiheuttaa astian nesteen haihtumisen, mikä on huomattava lääkkeiden tarkalle annostelulle. Siksi seuraavat kaksi toimenpidettä ovat välttämättömiä: a. Inkubaattorin ilman on oltava puhdas (säännöllinen ultraviolettivalo, alkoholin hankaus ja inkubaattori on avattava ja suljettava mahdollisimman vähän) b. Inkubaattorin kosteutta on aina pidettävä 100% (pesuallas steriilillä tislatulla vedellä, joka on sijoitettu inkubaattoriin).
Aivan kuten Petri-astia, se on myös astia, jossa on ylösalaisin kansi, eikä se saastuta. Pääasiassa kannen "L" -reunan tuottaman ilmavirran negatiivisen paineen vuoksi pölyyn on kiinnitetty mikro -organismeja, ja ilmavirran kuljettama pöly ei voi kulkea kannen reunan läpi, joka tuottaa negatiivista painetta. Tuuletusvaikutus tapahtuu vain ilman diffuusion kautta, eikä ilmavirtausta synty, joten se vain hengittää eikä tunkeudu bakteereihin.

kysyä:
24-kuoppalevyä käyttämällä joissakin kaivoissa on toimintoja (ultra-puhdas penkillä), ja muissa kaivoissa on soluja. Olen huolissani siitä, että tämä aiheuttaa saastumista. En tiedä mihin kiinnittää huomiota?

vastaus:
Jos operaatio standardisoidaan ultrapuhdistuksessa, sen pitäisi olla OK. Luulen, että voit hyödyntää viljelylevyn kannetta täysimääräisesti, yrittää paljastaa vain käytettävät reikät ja peittää muut reikät kansilla.
Harkitse kattavasti ennen käyttöä ja käytä kaikkia reikiä täysimääräisesti; Jos joudut käyttämään vain muutamaa reikää, voit käyttää vain yhtä puolta ja peittää loput kansilla. Olen tottunut käyttämään ensin oikeaa reikää (on kätevää lisätä näytteitä oikeaan käteen).

Kun käytät, käytä muutamia lasiolioita nostaaksesi levyn yhden puolen, älä avaa kannetta kokonaan, yleensä ei ongelmaa.
Epätasainen solujen jakautuminen ja ratkaisut

kysyä:
Solut ympätään viljelylevylle, ja solut keräävät aina ääreisosaan, miten sitä käsitellään?

vastaus:
Saanko kysyä, kuinka solusi ovat sekoittuneita? Onko se pipetoida vai ravistaa viljelylevyä? Jos se on jälkimmäinen, ja jos sitä ravistetaan ympyrässä, on erittäin todennäköistä, että solut heitetään ääreisosaan keskipakovoiman takia, mikä johtaa vähemmän soluja keskellä. Yli neljä viikkoa!
Tässä on hyvä tapa: ennen siemenlevyn viljelyä, laita viljelylevy inkubaattoriin muutaman tunnin kyllästymisellä ja ota se sitten pois. Voiman tulisi olla kevyt istuttaessa soluja. Lisäämällä hitaasti antaa solususpensioon virtaavan levyn kaivoihin, ja viljeltyjä solut kasvavat periaatteessa tasaisesti. Muista, ettet koskaan ravista ravistelijan kanssa, tai solut rypistyvät yhteen kuten sanoit.
Mitä pienempi viljelylevyn reiän halkaisija on, sitä ilmeisempi tämä ilmiö on. Tätä ilmiötä on väistämätön 24 ja 96 kuoppalevyille, koska neste tarttuu seinämään niin, että kaivon viljelyliuos ei muodosta nestemäistä tasoa, mutta reuna on korkea, aivan kuten kovera peili. Näiden kahden tyyppisiä aukulevyjä käytettäessä ei kuitenkaan ole mahdollista lisätä riittävästi viljelyliuosta lisäintervention tarpeen vuoksi, jotta solut näyttävät "reunakokoelmasta" yhdessä viljelyliuoksen kanssa. Se riippuu siitä, mitä indikaattoreita sinun on tarkkailtava. Jos se on MTT, immunohistokemia vaikuttaa tuloksiin, jotka johtuvat solujen kerrostamisesta.
Sulottaessa soluja kiinnitä huomiota tasaisesti solujen ryppyjen välttämiseksi, ja viljelyliuoksen määrän kaivossa tulisi olla riittävä. Lisää yleensä tarpeeksi viljelyratkaisua inokuloidessaan ja muuta ratkaisua kerran intervention lisäämisessä. Interventioliuokseen lisätty viljelyliuoksen määrä on yhtä suuri kuin viljelyliuoksen määrä inokulaation aikaan, tässä tapauksessa "reunajoukon" ilmiö paranee, joten voit myös kokeilla sitä.

kysyä:
Se mitä tein, oli plakin muodostumiskoe. On parasta levittää solut yhtenäiseen kerrokseen. Suurin osa reikistä on hienoja, kun virus siirretään, ja jotkut niistä eivät ole tasaisia. Soluryhmässä on suuria eroja. Haluaisin kysyä, mitä menetelmää käytät lisääessäsi soluja?

vastaus:
On kriittistä piippata solut yksisoluiseen suspensioon ruuansulatuksen jälkeen! Varmista, että kussakin kaivossa olevien solujen lukumäärä on yhdenmukainen levyn jakautuessa!
Tietysti on myös käsittelytekijöitä. Myös kaivojen välinen rinnakkaisuus on erittäin tärkeä. Esimerkiksi, kun lisäät lääkettä, sekoita lääke laimennuksen jälkeen varmistaaksesi, että kunkin kaivon pitoisuus on yhdenmukainen!
Lisäksi soluja ja lääkkeitä lisättäessä tesryhmä ja kontrolliryhmä tulisi lisätä vuorotellen, jotta vältetään solujen tiheyden ja lääkekonsentraation erot, jotka aiheutuvat näytteiden lisäämisjärjestyksestä!

kysyä:
Puhallus on jo tasainen, mutta lankku, 6 reikää ja 24 reikää ovat aina jonkin verran epätasaisia ​​ja hiukan keskittyneet keskelle. Lisäksi on selvää, että laskenta tehdään, ja päivän tai kahden kuluttua kunkin reiän tiheys on erilainen, mikä vaikuttaa havaitsemiseen. Onko hyvä tapa?

vastaus:
Jos käytät Pasteur -pipettiä, älä ime liikaa joka kerta, koska pipetin solut uppoutuvat automaattisesti, usein muutaman ensimmäisen reikän solujen lukumäärä on suuri ja solususpensio on usein tasainen ja neste tulee Seuraa S-muotoista reittiä.
Jos käytät pipettiä, kärjet tulisi prosessoida ja poistaa solujen vahingoittamisen välttämiseksi siten, että joka kerta, kun neste otetaan, vastaa kaivoa. On tarkempaa lisätä yksi-yksi-reikä kärkillä. Mutta kiinnitä myös huomiota jousituksen sekoittamiseen.

Rinnakkaisryhmän asettamiseksi N: n on oltava riittävän suuri (voit laskea sen).

Älä ravista pinnoituksen jälkeen, koska ravistaminen aiheuttaa solujen aggregoitumisen kohti keskustaa. On parasta lankku kerran.

Huokoinen soluviljelylevy Yongyue Medical on aina pitänyt laadunvalvontaa yrityksen elämänä ja pyrkinyt yrityksen kilpailukyvyn jatkuvaa parantamista. Yhtiö noudattaa aina lakien ja määräysten noudattamista koskevaa yrityksen henkeä. asiakkaiden tarpeet suurimmassa määrin. . Win-voitto asiakkaiden kanssa on kehitystavoitteemme. Yongyue Medical! Luotettava kumppani. Olemme valmiita tekemään yhteistyötä teidän kanssanne paremman tulevaisuuden luomiseksi.